S-异戊烯化位点鉴定

S-异戊烯化是一种蛋白翻译后的脂质修饰,它靶向控制许多膜蛋白,都是在癌症和微生物感染中重要的细胞信号通路中起关键作用的分子。

S-异戊烯化通常是法尼基(15-碳)或香叶酰(20-碳)异戊二烯类脂链在蛋白上通过硫醚键在位于C末端货附近的一个或者两个半胱氨酸残基上的翻译后修饰。S-异戊烯化蛋白中最大的一部分是包含Ras、Rho和Rab家族蛋白的小G蛋白(small GTPases)。

S-异戊烯化蛋白的意义是促进了生物合成通路中的分解。S-异戊烯化前体来自于焦磷酸异戊二烯基底物。法尼基转移酶(FTase)催化法尼基二磷酸(FPP)转移到蛋白质上,同时释放了一个游离的二磷酸。香叶基香叶转移酶1型和2型(GGTsae-I和GGTase-II)以香叶基二磷酸(GGPP)为底物。FTase和GGTase-I识别C端CaaX基序,其中C是修饰的半胱氨酸。

传统意义上,S-酰化蛋白是通过使用诸如甲戊酸、FPP和GGPP等放射性底物进行代谢标记来显示的,这些底物敏感性低,且需要长时间暴露才能进行检测(数周至数月)。为了解决这些限制,蛋白酰化的化学报告集团被研发出来,用以改善脂化蛋白的检测。在哺乳动物细胞中,荧光(NBD-GPP和NBD-FPP)和生物素化(BGPP)类似的异戊二烯二磷酸盐已经成功地结合到S酰化蛋白上,但荧光集团和生物素的体积大小可能会干扰蛋白的膜靶向和下游信号传导。叠氮和烷基异戊二烯二磷酸盐与生物正交连接为S-酰化蛋白的可视化提供了改进的方法。

叠氮基香叶基二磷酸和烷基香叶基二磷酸酯可在体外对含有CaaX基序的多肽和蛋白进行选择性标记,叠氮基香叶基二磷酸酯可以再体外对香叶基话蛋白进行GGTase-I和GGTase-II标记。

在哺乳动物细胞中,叠氮法尼醇(Az-FOH)和叠氮香叶醇的代谢掺入分别与法尼基化合香叶化蛋白结合,进一步改善了上述情况。

AIMS提供的是高效专业的蛋白异戊烯化鉴定服务,有专业的HPLC-MS/MS质谱平台,可以分析各种真核生物和原核生物样本。

服务流程

  • 目标修饰蛋白标记(depends on type of samples you send us)
  • 异戊烯化肽段替换后富集 (optional; depends on the abundance of phosphor-peptide)
  • HPLC 分离, 随后进行MS/MS 分析
  • 异戊烯化位点数据分析

服务优势

  • 应用范围广:可对各种蛋白进行异戊烯化位点定性和相对定量分析,可找出具体修饰发生位点,结果可信可靠,可给出具体修饰肽段。
  • 操作简单方便:无需进行放射性同位素标记或者Edman降解法进行氨基酸测序。
  • 位点高覆盖(可选):质谱检测前处理可对异戊烯化肽段进行标记处理,增加检测覆盖率。

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