本页面是S-过硫化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标蛋白，需要精确定位其上的S-过硫化修饰位点，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性S-过硫化分析，请访问 S-过硫化蛋白质组学。
硫化氢（H2S）被认为是继 NO 和 CO 之后的第三种内源性气体递质。H2S 在哺乳动物组织中由三种关键酶合成：胱硫醚 γ-裂解酶（CSE）、胱硫醚 β-合酶（CBS）和 3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）。H2S 广泛存在于中枢和周围神经系统、心血管、免疫和消化系统中，介导血管舒张、细胞凋亡、炎症及抗癌/致癌等多种生物学效应。
S-过硫化（S-sulfhydration, PSSH）是 H2S 对目标蛋白特定半胱氨酸残基的化学修饰，将自由巯基（-SH）转化为过硫化物基团（-SSH）。与 S-亚硝基化类似，蛋白 S-过硫化可被硫氧化还原蛋白（Trx）系统逆转。S-过硫化在信号传导、抗氧化防御和蛋白功能调控中扮演重要角色。
S-过硫化位点鉴定的核心挑战在于区分过硫化物基团（-SSH）和硫醇基团（-SH），因为两者的化学反应性相似。目前已发展出多种特异性检测策略。
S-过硫化检测策略
由于 -SSH 和 -SH 的反应性相似，发展了多种间接检测策略：
改良生物素开关法
原理：MMTS 封闭自由巯基，Bio-HPDP 偶联过硫化物基团，免疫沉淀后 Western Blot 检测
优势：基于经典生物素开关改良，实验流程熟悉
局限：MMTS 对 -SH 和 -SSH 的选择性有限，基础 S-硫化蛋白中可能有假阳性
适用场景：蛋白水平的 PSSH 初筛和验证
MMTS 封闭Bio-HPDP初筛验证
标签开关法（Tag Switch）
原理：MSBT 封闭所有巯基，含亲核试剂和生物素的试剂仅标记过硫化物
优势：对 -SSH 的选择性优于改良生物素开关法
改进版本：使用氰乙酸衍生物（BODIPY/Cy3）提高灵敏度，可进行荧光凝胶检测
适用场景：高特异性 PSSH 检测，定量分析
MSBT 封闭高选择性Cy3 荧光
技术方案
S-过硫化位点鉴定主要采用改良生物素开关法或标签开关法结合 LC-MS/MS 分析。标准流程如下：
巯基封闭MMTS 封闭自由巯基
→
PSSH 标记Bio-HPDP / MSBT 特异性标记过硫化位点
→
亲和富集链霉亲和素珠富集修饰肽段
→
LC-MS/MS高分辨质谱采集
→
位点定位PSSH 位点确认
服务优势
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多种检测策略
提供改良生物素开关法和标签开关法两种策略，可根据研究需求选择最适合的方案。
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H2S 信号特异性
通过特异性探针标记过硫化修饰蛋白，可进行定性与定量分析。
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靶向精准
针对已知目标蛋白进行定向分析，结果精确到具体半胱氨酸残基。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，确保 PSSH 修饰肽段检测的灵敏度和位点定位精度。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
S-过硫化位点鉴定和 S-过硫化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白，精准定位 PSSH 发生在哪个半胱氨酸残基上。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性分析。已知目标蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。
S-过硫化和 S-亚硝基化有什么相似之处？
两者都是对半胱氨酸巯基的可逆修饰：S-亚硝基化添加 NO 基团（-SNO），S-过硫化添加 SSH 基团（-SSH）。两者都可被硫氧化还原蛋白（Trx）系统逆转，在氧化还原信号传导中起类似作用。检测方法也有相似之处（如生物素开关法）。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，细胞样本 2×107 个，最低蛋白质量 1mg。样本制备需快速处理，避免过硫化修饰的非特异性变化。可使用 H2S 供体（如 NaHS、GYY4137）处理样本增强信号。
如何排除假阳性？
改良生物素开关法中 MMTS 对 -SH 和 -SSH 的选择性有限，建议：1) 设置不含 DTT 的对照排除非特异性标记；2) 使用标签开关法（MSBT）作为正交验证；3) 质谱直接检测 PSSH 的特征质量偏移。
项目周期多长？
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括：原始质谱数据、PSSH 位点定位结果表、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性S-过硫化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
