本页面是泛素化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标蛋白，需要精确定位其上的泛素化修饰位点，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性泛素化分析，请访问 泛素化蛋白质组学。
泛素化是一种功能强大的蛋白翻译后修饰，最为人知的是其在蛋白降解中的作用。泛素-蛋白酶体系统（UPS）通过 E1（激活酶）、E2（结合酶）、E3（连接酶）的酶级联反应，将泛素（76 个氨基酸，8.5 kDa）标记到目标蛋白的赖氨酸残基上。去泛素化酶（DUB）可逆转这一过程。
蛋白底物可发生多种泛素化模式：单一泛素化（monoubiquitination）、多单泛素化（multi-monoubiquitination）和多聚泛素化（polyubiquitination）。多聚泛素链可通过泛素分子上 7 个赖氨酸残基（K6、K11、K27、K29、K33、K48、K63）或 Met1 连接，形成不同链类型，各有不同的生物学功能。其中 K48 链主要介导蛋白酶体降解，K63 链参与信号转导和 DNA 修复。
泛素化位点鉴定的核心目标是：在已知的特定蛋白上，精确鉴定泛素化发生在哪一个赖氨酸残基上，并利用 di-Gly remnant 策略确认修饰位点。
泛素化修饰类型
蛋白泛素化有多种模式，在生物学功能和检测方法上各有不同：
单泛素化与多单泛素化
单泛素化：单个泛素分子连接在底物蛋白的一个赖氨酸残基上
多单泛素化：多个赖氨酸残基各连接一个泛素分子
生物学功能：膜蛋白内吞、DNA 修复、组蛋白调控、蛋白分选
检测特点：di-Gly remnant 策略直接定位修饰位点
Monoubiquitination膜蛋白调控DNA 修复
多聚泛素化
同型多聚泛素化：泛素链通过同一赖氨酸残基（K48/K63 等）连接
异型多聚泛素化：泛素链通过不同赖氨酸残基混合连接
链类型功能：K48-蛋白酶体降解、K63-信号转导/DNA 修复、K11-细胞周期
检测特点：可结合链特异性抗体或 UB chain restriction analysis
PolyubiquitinationK48/K63蛋白酶体降解
技术方案
泛素化位点鉴定利用泛素 remnant（di-Gly）策略：胰蛋白酶酶切后，泛素化的赖氨酸残基上会保留一个二甘氨酸（di-Gly, +114.043 Da）标记，通过抗 di-Gly 抗体富集修饰肽段后进行 LC-MS/MS 分析。标准流程如下：
蛋白提取目标蛋白纯化/SDS-PAGE 分离
→
酶切消化胰蛋白酶酶解（保留 di-Gly remnant）
→
肽段富集抗 di-Gly 抗体免疫亲和富集
→
LC-MS/MS高分辨质谱采集
→
位点定位泛素化位点确认
服务优势
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di-Gly remnant 策略
利用泛素 remnant（di-Gly, +114.043 Da）标记精确定位泛素化赖氨酸位点，方法成熟、特异性高。
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多聚泛素链类型分析
可分析不同种类的聚泛素化类型（K48、K63、K11 等），揭示泛素化修饰的生物学功能。
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靶向精准
针对已知目标蛋白进行定向分析，结果精确到具体赖氨酸残基。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，确保 di-Gly remnant 检测的灵敏度和位点定位精度。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
泛素化位点鉴定和泛素化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白，精准定位泛素化发生在哪个赖氨酸残基上。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性泛素化分析，适合发现新的泛素化底物。已知目标蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。
di-Gly remnant 策略是什么？
胰蛋白酶酶切泛素化蛋白后，泛素化的赖氨酸残基上会保留一个二甘氨酸（Gly-Gly, di-Gly）remnant，质量偏移为 +114.043 Da。通过抗 di-Gly 抗体特异性富集这些修饰肽段，再用 LC-MS/MS 鉴定，即可精确定位泛素化位点。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，细胞样本 2×107 个，最低蛋白质量 1mg。支持 SDS-PAGE 胶条和蛋白溶液样本。建议使用泛素化蛋白酶体抑制剂（如 MG132）处理样本以提高泛素化信号。
如何区分不同的泛素链类型？
不同链类型（K48、K63 等）可通过泛素链限制性分析或链特异性抗体来区分。质谱方法中，不同链类型产生的 di-Gly 修饰肽段可反映连接位点。如需链类型分析，请在送样时说明。
项目周期多长？
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括：原始质谱数据、泛素化位点定位结果表、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性泛素化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
