本页面是磷酸化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标蛋白，需要精确定位其上的磷酸化修饰位点，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性磷酸化分析，请访问 磷酸化蛋白质组学。
蛋白磷酸化是最为广泛、研究最为深入的翻译后修饰之一。磷酸化过程在生物体中是可逆的，通过蛋白激酶（kinase）和蛋白磷酸酶（phosphatase）协同调控。据估计细胞中约 1/3 的蛋白同时发生磷酸化，所有生命过程都通过此修饰直接或间接调控。
真核磷酸化位点主要发生在丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr），其中丝氨酸磷酸化占比最高（约 86%），苏氨酸约 12%，酪氨酸约 2%。原核磷酸化则主要发生在组氨酸（His）、精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys）。磷酸化修饰通过分子开关机制，影响蛋白酶活性、蛋白互作、亚细胞定位、构象变化和蛋白稳定性。
磷酸化位点鉴定的核心目标是：在已知的特定蛋白上，精确鉴定磷酸化发生在哪一个 Ser/Thr/Tyr 残基上，为激酶-底物关系验证和信号通路研究提供确凿证据。
磷酸化位点类型
真核蛋白磷酸化主要发生在三种氨基酸残基上，各有不同的研究策略和生物学意义：
丝氨酸/苏氨酸磷酸化
连接位点：丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）残基的羟基
占比：所有磷酸化位点的 ~98%（Ser ~86%, Thr ~12%）
催化酶：Ser/Thr 激酶（如 AKT、MAPK、CDK、PKA 等）
质量偏移：+79.966 Da（HPO3）
分析特点：丰度较高，TiO2/IMAC 富集效果好，位点定位相对容易
Ser/Thr主要类型TiO2 富集
酪氨酸磷酸化
连接位点：酪氨酸（Tyr）残基的酚羟基
占比：所有磷酸化位点的 ~2%，但信号意义重大
催化酶：酪氨酸激酶（如 EGFR、Src、ABL、JAK 等）
质量偏移：+79.966 Da（HPO3）
分析特点：丰度低，需抗 pTyr 抗体或 SH2 结构域富集，位点鉴定难度大
Tyr低丰度受体激酶信号转导
技术方案
磷酸化位点鉴定针对特定目标蛋白，通过磷酸肽特异性富集后进行 LC-MS/MS 分析，精确定位修饰位点。标准流程如下：
蛋白提取目标蛋白纯化/SDS-PAGE 分离
→
酶切消化凝胶或溶液内胰蛋白酶酶解
→
磷酸肽富集TiO2/IMAC 亲和富集
→
LC-MS/MS高分辨质谱采集
→
位点定位磷酸化位点确认
服务优势
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S/T/Y 全覆盖
一次实验同时检测丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点，覆盖三种主要磷酸化类型。
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靶向精准
针对已知目标蛋白进行定向磷酸化分析，结果精确到具体氨基酸残基，直接服务于激酶-底物关系验证。
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多种富集策略
可选 TiO2、IMAC、抗 pTyr 抗体等多种磷酸肽富集方法，针对不同磷酸化类型优化检测效果。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，确保磷酸化肽段检测的灵敏度和位点定位精度（localization probability ≥ 0.75）。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
磷酸化位点鉴定和磷酸化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白，精准定位磷酸化发生在哪个 Ser/Thr/Tyr 残基上。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性磷酸化分析，适合探索激酶调控网络和发现新位点。已知目标蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。
酪氨酸磷酸化为什么比丝氨酸/苏氨酸更难检测？
酪氨酸磷酸化仅占所有磷酸化事件的约 2%，丰度远低于 Ser/Thr 磷酸化。此外，酪氨酸激酶的底物通常是低丰度信号蛋白。因此需要更大量的起始样本和特异性富集策略（如抗 pTyr 抗体免疫沉淀或 SH2 结构域亲和）。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，细胞样本 2×107 个，最低蛋白质量 1mg。支持 SDS-PAGE 胶条和蛋白溶液样本。酪氨酸磷酸化分析建议提供 ≥ 500μg 蛋白起始量。
如何确定磷酸化位点的定位置信度？
采用 Ascore 或 PTM-Score 等算法评估位点定位概率。 localize 置信度 ≥ 0.75 被认为是可靠定位。HCD 碎裂产生的中性丢失（-98 Da, H3PO4）和特征碎片离子用于确认磷酸化位点。
项目周期多长？
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括：原始质谱数据、磷酸化位点定位结果表（含定位概率）、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性磷酸化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
