肽图分析服务 | RPLC-MS/MS 肽段定位

单克隆抗体是生物制药行业正在开发的一类新兴疗法。单克隆抗体包含数百种氨基酸，其中任何一种的变化都可能导致效力降低或安全性增加的担忧。与传统的小分子药物不同，抗体要大得多（约 150 kDa），并且在细胞培养生产、纯化和储存过程中会发生广泛的酶促和非酶促反应。

最常见的变异包括 N 端焦谷氨酸 (pE) 形成，蛋氨酸 (M) 氧化，天冬酰胺 (N) 脱酰胺化，天冬氨酸 (D) 异构化，C 端赖氨酸 (K) 截断和糖基化。研究这些分离的电荷变体通常需要一种自下而上的基于肽图谱的方法，包括反相液相色谱与串联质谱检测 (RPLC-MS/MS)。

多肽定位在单克隆抗体鉴定中起着关键作用，例如提供翻译后修饰、序列改变等信息。结合质谱仪，肽图谱是最常用的表征工具，进一步研究不同抗体电荷变体形成的根本原因。在多肽定位中，单克隆抗体首先被胰蛋白酶等酶消化成短肽，然后用 RPLC-MS/MS 进行分离和鉴定。

服务优势

通过液质联用方法进行分析，获取的肽段以及修饰基团都真实可靠。

可以提供关于浓度微小变化和液相色谱不完全分离的准确信息。

可针对客户的个性化需求，选择对应的修饰情况以及关注肽段信息。

蛋白质经特异性蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成肽段混合物，然后通过反相液相色谱 (RPLC) 分离并与串联质谱 (MS/MS) 联用进行鉴定。通过与理论序列比对，可确认蛋白一级结构、检测翻译后修饰（氧化、脱酰胺、糖基化等）和序列变异。

单克隆抗体包含数百种氨基酸，在生产和储存过程中可能发生氧化（甲硫氨酸）、脱酰胺（天冬酰胺）、异构化（天冬氨酸）、C 端赖氨酸截短和糖基化等变异。肽图分析可精确定位这些修饰位点和定量各变体的比例。

可采用多种蛋白酶组合（胰蛋白酶 + Lys-C + Asp-N）进行消化，优化酶切条件（温度、时间、酶/底物比），并使用高分辨质谱（Orbitrap 系列）提高鉴定灵敏度。通常可达到 >95% 的序列覆盖率。