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衣康酸是由顺式-乌头酸脱羧酶 (ACOD1,也称为 IRG1 和 CAD)催化反应,使顺式-乌头酸脱羧生成,该酶是一种由免疫反应基因 1 ( irg1 ) 编码的线粒体基质酶。顺式-乌头酸是 TCA 循环中的临时中间体,因此通常不出现在 TCA 循环的 8 个不同步骤中。顺式-乌头酸可以在乌头酸酶催化异构化的限速步骤15中释放,该异构化涉及两步脱水一再水化序列,将柠檬酸通过顺式-乌头酸转化为异柠檬酸。柠檬酸源自TCA循环的第一步:柠檬酸合酶(CS)催化的乙酰辅酶A和草酰乙酸的缩合。
衣康酸是免疫代谢中的重要代谢物,可对目标蛋白进行翻译后修饰,影响蛋白功能。近年来研究发现衣康酸化修饰在固有免疫应答中发挥关键调控作用。
全蛋白衣康酸检测试剂盒(细胞标记)AM10216是针对多数研究细胞内蛋白衣康酸修饰位点检测所开发的专业试剂盒。本产品基于点击化学(CUAAC)标记技术,通过对活体细胞进行特异性探针标记,再进行试剂盒处理,最后用免疫印迹的方法进行全部蛋白衣康酸位点检测。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 检测原理 | 基于点击化学(CuAAC)原理 |
| 主要应用 | 全蛋白衣康酸化修饰检测(活细胞标记法) |
| 检测方法 | 免疫印迹法(Western Blot) |
| 结果读取 | 链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)化学发光检测 |
| 样本类型 | 活细胞(需先进行探针标记) |
| 保存条件 | 大部分组分4℃保存,Strepdavidin-HRP -20℃保存 |
| 运输条件 | 冰袋运输,确保试剂活性 |
| 试剂名称 | 组分编号 | 体积/数量 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer (探针反应缓冲液) | Solution I | 240 μL | 4℃ |
| Lysis Buffer (裂解缓冲液) | Solution II | 4 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer (点击标记缓冲液) | Solution III | 400 μL | 4℃ |
| Strepdavidin-HRP (链霉亲和素-HRP) | Solution IV | 40 μL | -20℃ |
| 试剂名称 | 组分编号 | 体积/数量 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer (探针反应缓冲液) | Solution I | 60 μL | 4℃ |
| Lysis Buffer (裂解缓冲液) | Solution II | 800 μL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer (点击标记缓冲液) | Solution III | 80 μL | 4℃ |
| Strepdavidin-HRP (链霉亲和素-HRP) | Solution IV | 40 μL | -20℃ |
衣康酸是由顺式-乌头酸脱羧酶 (ACOD1/IRG1)催化生成的一种免疫代谢物,在巨噬细胞等免疫细胞中显著上调。它具有抗菌和抗炎作用,并可通过烷基化修饰蛋白质的半胱氨酸残基,调节细胞代谢与免疫功能。
本试剂盒基于点击化学(CuAAC)原理:1)活细胞用含炔基的衣康酸探针标记;2)细胞裂解;3)通过点击化学反应将生物素连接到探针上;4)链霉亲和素-HRP Western Blot检测。该方法可高效特异检测蛋白衣康酸化修饰。
大部分组分需4℃保存:Solution I (Probe reaction buffer), Solution II (Lysis Buffer), Solution III (CUAAC click labeling Buffer)。Solution IV (Strepdavidin-HRP)需-20℃保存。所有组分避免反复冻融,工作液建议现配现用。