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核磁共振可以对蛋白质三级结构进行测定,为结构生物学研究提供了许多独特的特征,是蛋白类药物结构和功能研究的重要工具之一。
核磁共振 (Nuclear Magnetic Resonance, NMR) 波谱技术是一种强大的结构研究工具,可以对蛋白质三级结构进行测定,为结构生物学研究提供了许多独特的特征。NMR 能够在接近生理条件的溶液态下研究蛋白质的结构和动态行为。
在生物制药领域,NMR 被用于蛋白高级结构表征、批次间一致性评估、表位定位和生物类似药可比性研究。特别是 1H-15N HSQC 谱图的"指纹"比对,可快速评估蛋白折叠状态的一致性。
多种蛋白类型的 NMR 分析经验,覆盖单抗片段、融合蛋白和小分子药物互作研究。
对于小到中等蛋白,NMR 分析成本低于 X-ray 晶体分析。
HSQC 指纹比对、化学位移扰动、弛豫分析等多种 NMR 实验方法。
常规 1H-15N HSQC 适用于 <30 kDa 的蛋白;结合 TROSY 和氘代标记技术可扩展至 50-100 kDa。对于抗体等大分子,NMR 主要用于表位定位和局部构象分析而非完整结构解析。
NMR 在溶液态天然环境下测定蛋白结构,可捕捉蛋白动态构象变化;X-ray 需要蛋白结晶,提供静态的高分辨率结构。NMR 无需结晶但分子量受限,X-ray 分辨率更高但可能引入结晶假象。
ICH Q6B 推荐 NMR 作为蛋白高级结构表征工具。主要应用包括:批次间结构一致性比较、配方稳定性监测、表位定位(抗体-抗原互作)和生物类似药与原研药的结构可比性评估。