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蛋白质异戊烯化是一种普遍存在的共价翻译后修饰,其特征是在位于蛋白质羧基末端附近的半胱氨酸残基上添加法尼基或香叶基类异戊二烯基。它对许多蛋白质的适当定位和细胞活性至关重要。除了在细胞生理学中发挥作用外,异戊烯化过程在人类疾病中也具有重要意义,近年来,它已成为具有治疗潜力的抑制剂的有吸引力的靶点。
本产品是一种基于点击化学原理,并能结合WB技术快速检测目标蛋白异戊烯修饰的检测试剂盒。产品中含有配套使用的各种缓冲液,无需再进行其他复杂特定试剂的配置。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 检测原理 | 点击化学(CuAAC)结合免疫印迹 |
| 检测修饰类型 | 蛋白质法尼基化与香叶基化(混合异构体) |
| 检测方法 | 免疫印迹法(Western Blot) |
| 结果读取 | 链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)化学发光检测 |
| 样本起始 | 活体细胞(需先进行代谢探针标记) |
| 保存条件 | 所有组分4℃保存(详见组分表) |
| 运输条件 | 冰袋运输,收货后请立即置于4℃ |
| 试剂名称 | 试剂编号 | 体积(正式) | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 260 µL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 10 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 450 µL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 340 µL | 4℃ |
| Strepdavidin-Beads | Solution V | 1300 µL | 4℃ |
| 说明书 | 1 份 |
| 试剂名称 | 试剂编号 | 体积(正式) | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 60 µL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 2 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 80 µL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 80 µL | 4℃ |
| Strepdavidin-Beads | Solution V | 260 µL | 4℃ |
| 说明书 | 1 份 |
本试剂盒基于点击化学(Click Chemistry)中的铜催化叠氮-炔环加成(CuAAC)反应。首先利用带有炔基(或叠氮)的异戊烯类探针对活细胞中的异戊烯化蛋白进行代谢标记,然后裂解细胞,通过CuAAC反应将带有生物素(或叠氮)的标签连接到标记的蛋白上,最后利用链霉亲和素-HRP进行Western Blot检测。该方法对法尼基化和香叶基化修饰均有良好的检测能力。
完整的实验流程通常需要2-3天,具体取决于细胞培养、探针标记孵育时间以及Western Blot步骤。主要时间分布为:探针标记(通常过夜孵育,~16小时)→ 细胞裂解与处理(2-3小时)→ 点击化学标记反应(2小时)→ 免疫印迹检测(1-2天)。试剂盒提供了优化的缓冲液,可简化操作步骤。
所有主要缓冲液组分(Solution I-V)均需在4℃条件下保存。请勿冷冻。其中Solution III(CUAAC click labeling Buffer)含有铜催化剂,应避免反复冻融和光照。建议在收到产品后,按照单次实验用量进行分装,并于4℃稳定保存。工作液建议现配现用。
本试剂盒使用的探针和化学标记方法可同时检测蛋白质的法尼基化(15碳)和香叶基化(20碳)修饰,即混合异构体检测。它适用于检测CAAX box或含有异戊烯化修饰半胱氨酸残基的蛋白。