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Immunoprecipitation-prenylation (mix isomers) - for WB | 目标蛋白异戊烯免疫印迹检测试剂盒
AM10926异戊烯修饰检测试剂盒

Immunoprecipitation-Prenylation (mix isomers) For WB 目标蛋白异戊烯免疫印迹检测试剂盒

基于点击化学(CuAAC)原理,结合免疫印迹技术,用于快速、特异性检测目标蛋白的法尼基或香叶基异戊烯化修饰。

产品亮点

同时覆盖法尼基化和香叶基香叶基化高灵敏度检测低丰度修饰配套完整缓冲液与阳性对照
货号规格价格(CNY)操作
AM109264rxns¥3288
AM1092620rxns¥8688
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产品概述

蛋白质异戊烯化是一种普遍存在的共价翻译后修饰,其特征是在位于蛋白质羧基末端附近的半胱氨酸残基上添加法尼基或香叶基类异戊二烯基。它对许多蛋白质的适当定位和细胞活性至关重要。除了在细胞生理学中发挥作用外,异戊烯化过程在人类疾病中也具有重要意义,近年来,它已成为具有治疗潜力的抑制剂的有吸引力的靶点。

本产品是一种基于点击化学原理,并能结合WB技术快速检测目标蛋白异戊烯修饰的检测试剂盒。产品中含有配套使用的各种缓冲液,无需再进行其他复杂特定试剂的配置。

技术参数

参数规格
检测原理点击化学(CuAAC)结合免疫印迹
检测修饰类型蛋白质法尼基化与香叶基化(混合异构体)
检测方法免疫印迹法(Western Blot)
结果读取链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)化学发光检测
样本起始活体细胞(需先进行代谢探针标记)
保存条件所有组分4℃保存(详见组分表)
运输条件冰袋运输,收货后请立即置于4℃

试剂盒组分

组分列表(20次反应)

试剂名称试剂编号体积(正式)储存温度
Probe reaction bufferSolution I260 µL4℃
Lysis BufferSolution II10 mL4℃
CUAAC click labeling BufferSolution III450 µL4℃
Blocking ReagentSolution IV340 µL4℃
Strepdavidin-BeadsSolution V1300 µL4℃
说明书1 份

组分列表(4次反应)

试剂名称试剂编号体积(正式)储存温度
Probe reaction bufferSolution I60 µL4℃
Lysis BufferSolution II2 mL4℃
CUAAC click labeling BufferSolution III80 µL4℃
Blocking ReagentSolution IV80 µL4℃
Strepdavidin-BeadsSolution V260 µL4℃
说明书1 份

实验流程

探针标记 特异性探针标记活细胞
细胞裂解 裂解细胞提取蛋白
生物素标记 CuAAC点击反应连接生物素
捕获 链霉亲和素珠子捕获修饰蛋白
检测 Streptavidin-HRP Western Blot检测

实验案例

常见问题

该试剂盒的检测原理是什么?

本试剂盒基于点击化学(Click Chemistry)中的铜催化叠氮-炔环加成(CuAAC)反应。首先利用带有炔基(或叠氮)的异戊烯类探针对活细胞中的异戊烯化蛋白进行代谢标记,然后裂解细胞,通过CuAAC反应将带有生物素(或叠氮)的标签连接到标记的蛋白上,最后利用链霉亲和素-HRP进行Western Blot检测。该方法对法尼基化和香叶基化修饰均有良好的检测能力。

实验流程需要多长时间?

完整的实验流程通常需要2-3天,具体取决于细胞培养、探针标记孵育时间以及Western Blot步骤。主要时间分布为:探针标记(通常过夜孵育,~16小时)→ 细胞裂解与处理(2-3小时)→ 点击化学标记反应(2小时)→ 免疫印迹检测(1-2天)。试剂盒提供了优化的缓冲液,可简化操作步骤。

试剂盒应该如何保存?

所有主要缓冲液组分(Solution I-V)均需在4℃条件下保存。请勿冷冻。其中Solution III(CUAAC click labeling Buffer)含有铜催化剂,应避免反复冻融和光照。建议在收到产品后,按照单次实验用量进行分装,并于4℃稳定保存。工作液建议现配现用。

可以检测哪种类型的异戊烯化修饰?

本试剂盒使用的探针和化学标记方法可同时检测蛋白质的法尼基化(15碳)和香叶基化(20碳)修饰,即混合异构体检测。它适用于检测CAAX box或含有异戊烯化修饰半胱氨酸残基的蛋白。

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