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肉豆蔻酰化是一种14-碳的饱和脂肪酸,肉豆蔻酸,附着在一个真核蛋白质亚群的N端甘氨酸上。虽然经常被称为蛋白翻译后修饰PTM,但它通常发生共翻译,当核糖体聚合不到100个残基时,并在去掉领头的蛋氨酸之后发生甲硫氨酸氨基肽酶的残留物,暴露N端甘氨酸。催化肉豆蔻酸转移的酶是肉豆蔻酰基辅酶a:N-肉豆蔻酰基转移酶(NMT)。肉豆蔻酰辅酶a底物首先与载脂蛋白酶结合,引起构象变化,从而允许肽底物结合。N端甘氨酸胺攻击肉豆蔻酰基辅酶a (myr-CoA)硫酯,通过亲核取代进行化学转化;先释放CoA产物,再释放肉豆蔻酰基化肽。
本产品是一种基于点击化学原理,并能结合WB技术快速检测全蛋白豆蔻酰修饰的检测试剂盒。产品中含有配套使用的各种缓冲液,无需再进行其他复杂特定试剂的配置。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 检测原理 | 点击化学结合生物素-链霉亲和素系统 |
| 主要应用 | 全蛋白水平豆蔻酰化修饰检测 |
| 检测方法 | 免疫印迹法(Western Blot) |
| 检测系统 | Streptavidin-HRP化学发光检测 |
| 样本类型 | 活体细胞(需先进行探针标记) |
| 保存条件 | 大部分组分4℃保存,Strepdavidin-HRP需-20℃保存 |
| 运输条件 | 冰袋运输,确保试剂活性 |
| 试剂名称(20次反应) | 试剂编号 | 体积 | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 240 μL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 8 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 400 μL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 340 μL | 4℃ |
| Strepdavidin-HRP | Solution V | 40 μL | -20℃ |
| 试剂名称(4次反应) | 试剂编号 | 体积 | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 60 μL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 1600 μL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 80 μL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 80 μL | 4℃ |
| Strepdavidin-HRP | Solution V | 40 μL | -20℃ |
本试剂盒基于点击化学原理,通过特异性探针对活细胞中的豆蔻酰化蛋白进行标记,然后通过生物素-链霉亲和素系统进行Western Blot检测。主要流程包括:探针标记→细胞裂解→生物素标记→Streptavidin-HRP检测。
本试剂盒设计用于检测全蛋白水平的豆蔻酰化修饰,可以同时检测样本中所有发生豆蔻酰化修饰的蛋白质,适用于全局性豆蔻酰化修饰谱的分析。
试剂盒不同组分保存条件不同:大部分缓冲液需4℃保存,Strepdavidin-HRP需-20℃保存。具体保存条件请参考试剂盒组分表中的详细说明。建议收到后按说明储存,避免反复冻融。