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蛋白质高阶结构 (HOS) 是重要的产品质量属性,红外光谱技术是测定蛋白质二级结构和监测动态结构变化的有力生物物理工具。
蛋白质高阶结构 (Higher Order Structure, HOS) 是一种重要的产品质量属性,决定着治疗性蛋白的结构-功能特性、安全性和有效性。红外光谱技术一直被认为是测定蛋白质二级结构和监测蛋白质动态结构变化的有力生物物理工具。
这种生物物理分析有助于建立工艺和产品知识,为配方开发、稳定性研究和批次间一致性评估提供关键的结构数据。FTIR 特别适用于固态样品(如冻干制剂)和高浓度蛋白制剂的结构分析。
多种蛋白药物类型的 FTIR 分析经验,覆盖单抗、融合蛋白和疫苗等。
FTIR 分析成本较低,适合大量样品的结构筛查和稳定性监测。
酰胺 I 带去卷积分析配合 ATR 和透射双模式,确保数据质量。
蛋白质的酰胺 I 带 (1600-1700 cm-1) 吸收峰位置与二级结构类型直接相关:alpha 螺旋约 1650-1658 cm-1,beta 折叠约 1620-1640 cm-1,无规卷曲约 1640-1650 cm-1。通过二阶导数或去卷积处理可提高分辨率。
FTIR 基于分子振动吸收,适用于固态(冻干粉、薄膜)和高浓度溶液样品;CD 基于圆偏振光差异吸收,更适合低浓度溶液态样品的精确二级结构定量。两者互补可获得更全面的结构信息。
溶液态样品蛋白浓度 >1 mg/mL,避免含强红外吸收的缓冲液(如 Tris 在 1600 cm-1 附近有吸收)。推荐使用 D2O 替代 H2O 以减少水吸收干扰。固态样品可直接以 KBr 压片或 ATR 模式测量。