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确定蛋白质 alpha 螺旋和 beta 折叠结构比例,监测蛋白构象变化和热稳定性,为生物制药高级结构表征提供关键数据。
蛋白质和多肽的二级结构对其功能具有重要影响。圆二色谱 (Circular Dichroism, CD) 利用左旋和右旋圆偏振光被手性分子差异性吸收的原理,可以确定蛋白的 alpha 螺旋及 beta 折叠结构,对研究蛋白质和多肽的结构和功能具有重要作用。
由于 X 射线晶体学和核磁共振的实验限制(蛋白质的结晶或大小限制),许多蛋白质的三级结构仍然未知。CD 作为快速、低样品消耗的结构分析工具,在生物制药开发中被广泛用于配方筛选、稳定性研究和批次间一致性评估。
多年的蛋白结构分析经验,服务过的药物类型涵盖单抗、融合蛋白、ADC 和疫苗等。
CD 分析成本远低于 X-ray 和 NMR,适合大量样品的快速结构筛查和配方筛选。
远紫外和近紫外 CD 双模式分析,配合热变性实验评估蛋白热稳定性 (Tm)。
| 参数 | 要求 |
|---|---|
| 纯度 | >95% |
| 浓度 | >0.5 mg/mL |
| 总量 | >200 ug |
| 缓冲液 | PBS 或 Tris-HCl,盐浓度 <50 mM |
远紫外 CD (190-250 nm) 可定量 alpha 螺旋、beta 折叠、无规卷曲等二级结构组成比例;近紫外 CD (250-320 nm) 可探测芳香族氨基酸微环境变化,反映三级结构信息。
蛋白纯度 >95%,浓度 >0.5 mg/mL,总量 >200 ug。缓冲液需避免高盐(<50 mM)和强紫外吸收成分(如 DTT >1 mM)。建议使用 PBS 或 Tris-HCl 缓冲体系。
CD 对溶液态蛋白的二级结构定量更精确,样品消耗少;FTIR 适用于固态(冻干粉)和高浓度样品。两者互补使用可获得更完整的结构信息。