针对特定目标蛋白,精准定位 SUMO(Small Ubiquitin-like Modifier)修饰发生的精确赖氨酸残基。Aimsmass 基于 SUMO remnant 策略与高分辨 LC-MS/MS 平台,覆盖 SUMO1/2/3 亚型,为转录调控和蛋白功能研究提供分子水平的确切证据。
SUMO化是一种可逆的蛋白翻译后修饰,发生在蛋白的赖氨酸残基上,连接约 11 kDa 的 SUMO(Small Ubiquitin-like Modifier)小肽。与泛素化类似,SUMO化也需要 E1(SAE1/SAE2)、E2(Ubc9)和 E3 连接酶的级联反应协助完成。
SUMO化修饰参与多种蛋白功能调控:使蛋白单体聚合或分离、切换蛋白间互作关系、调控蛋白与 DNA 的结合。哺乳动物有四种 SUMO 亚型(SUMO1-4),其中 SUMO1 主要参与组成型修饰,SUMO2/3 在应激条件下大量表达。SUMO化修饰还与心血管疾病、癌症、神经退行性疾病和免疫疾病的发生发展密切相关。
SUMO化位点鉴定的核心目标是:在已知的特定蛋白上,精确鉴定 SUMO 修饰发生在哪一个赖氨酸残基上,并区分 SUMO 亚型。
哺乳动物有四种 SUMO 亚型,在表达模式和功能上各有不同:
表达模式:组成型表达,在正常生理条件下参与蛋白修饰
功能特点:主要参与蛋白-蛋白互作调控、核质运输、转录调控
remnant 质量:酶切后保留特定 di-Gly remnant
典型底物:RanGAP1、PML、p53、IκBα
表达模式:应激诱导型,在热休克、氧化应激等条件下大量表达
功能特点:参与应激反应、DNA 损伤修复、蛋白质量控制
链形成:SUMO2/3 可形成多聚链(SUMO1 通常不形成链)
典型底物:拓扑异构酶、DNA 修复蛋白、染色质调节因子
SUMO化位点鉴定利用 SUMO remnant 策略:胰蛋白酶酶切后,SUMO 修饰的赖氨酸残基上保留特征性 remnant,通过免疫亲和富集后进行 LC-MS/MS 分析。标准流程如下:
可区分 SUMO1 和 SUMO2/3 修饰,通过不同 remnant 质量偏移鉴定亚型。
针对已知目标蛋白进行定向分析,结果精确到具体赖氨酸残基。
可选 SUMO 修饰肽段免疫亲和富集,提高低丰度修饰位点的检测覆盖率。
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪(分辨率 240,000 @ m/z 200,扫描速度 40 Hz),搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统,确保 SUMO remnant 检测的灵敏度和位点定位精度。
常规动物组织:100mg
软体动物组织:1g
常规植物组织:1g
植物果实及种子:2g-4g
细胞样本:2×107
菌类样本:150mg
最低蛋白质量:1mg
检测平台:Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪(分辨率 240,000 @ m/z 200,扫描速度 40 Hz),搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白,样本量要求相对灵活,支持血清、重组蛋白等特殊样本,具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白,精准定位 SUMO 修饰发生在哪个赖氨酸残基上,并可区分 SUMO 亚型。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性 SUMO化分析,适合发现新的 SUMO 底物。已知目标蛋白选位点鉴定,探索未知选蛋白质组学。
SUMO 和泛素都是小蛋白修饰,但功能截然不同。泛素化主要介导蛋白酶体降解(K48 链),SUMO化则参与转录调控、核质运输和蛋白互作切换,通常不导致蛋白降解。两者的 remnant 质量偏移不同,质谱可区分。
常规动物组织 100mg,细胞样本 2×107 个,最低蛋白质量 1mg。支持 SDS-PAGE 胶条和蛋白溶液样本。SUMO化修饰丰度较低,建议提供足量样本。
SUMO1 和 SUMO2/3 的氨基酸序列不同,胰蛋白酶酶切后产生的 remnant 肽段质量不同。通过高分辨质谱可精确区分。SUMO2 和 SUMO3 序列高度相似,通常合并为 SUMO2/3 进行分析。
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括:原始质谱数据、SUMO化位点定位结果表(含 SUMO 亚型信息)、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
如需在全蛋白水平进行系统性SUMO化分析,或对其他修饰类型进行研究,可参考以下服务:
提交咨询,Aimsmass 技术团队将根据您的目标蛋白和研究目的,定制精准的SUMO化位点鉴定方案与报价。
获取位点鉴定方案与报价电话:021-51914748 | 邮箱:info@aimsmass.cn