KO 细胞池构建服务 | CRISPR 敲除混合细胞群体

AIMS 专业服务

敲除细胞池是使用 CRISPR-Cas9 技术生成的异质细胞群体，其中特定基因被靶向敲除。该过程涉及设计和合成靶向目标基因的 gRNA，将 CRISPR-Cas9 试剂转染到细胞中，并允许细胞增殖。由于转染效率和 CRISPR-Cas9 活性不会达到 100%，敲除细胞池将是具有不同基因型的细胞混合物。

敲除细胞池对各种研究应用都很有用，提供了诸如提高结果速度和更高编辑效率等优势。然而，它们不提供与克隆敲除细胞系相同水平的遗传同质性。因此，细胞池更适合初步验证和快速筛选，而正式的功能研究建议使用单克隆化的稳定细胞系。

构建步骤

步骤	操作内容
1. CRISPR 试剂设计	设计和构建靶向目标基因的 sgRNA 和 Cas9 表达载体或 RNP
2. 细胞转染	通过电穿孔或脂质体介导转染将 CRISPR 试剂导入细胞
3. 阳性细胞筛选	使用抗生素抗性或荧光蛋白筛选转染成功的细胞
4. 细胞扩增	筛选后的阳性细胞进行扩增培养
5. 敲除效率分析	PCR、Western blot 或测序验证敲除效率
6. 细胞池表征	评估编辑类型分布和群体异质性

服务优势

成本效益

生成成本通常比克隆敲除细胞系低得多，适合预算有限或需要同时测试多个基因的预实验。

时间效率

所需时间比克隆敲除细胞系少很多，三周内即可提供结果。

更高的成功率

专有多引导技术提高编辑效率，确保较高的敲除比例。

快速结果

适合时间紧迫的研究项目，可快速获取初步数据，指导后续实验方向。

应用场景

敲除细胞池在以下场景中具有独特优势：药物靶点初筛（快速评估多个候选靶点的敲除效果）、信号通路功能探索（系统性敲除通路组分观察表型变化）、CRISPR 方案优化（测试不同 sgRNA 的编辑效率）和预实验验证（在构建稳定细胞系前确认敲除可行性和表型方向）。

常见问题

KO 细胞池适合什么研究场景？

KO 细胞池适合：①初步功能验证——快速确认基因敲除后的表型方向；②预实验——在投入大量时间构建稳定细胞系之前进行可行性验证；③多基因筛选——同时构建多个基因的敲除池进行并行比较；④时间紧迫的项目——需要 3 周内获得结果的研究。

KO 细胞池的均一性如何？

KO 细胞池是异质细胞群体，包含未编辑、杂合敲除和纯合敲除等多种基因型的细胞。敲除效率通常为 60-80%，但不同细胞间的编辑状态不完全一致。如果需要均一的遗传背景，建议进一步进行单克隆化构建稳定细胞系。

KO 细胞池的验证包含哪些内容？

Aimsmass 对 KO 细胞池的验证包括：①Sanger 测序——确认基因组编辑位点和 Indel 类型；②Western blot（可选）——检测蛋白水平的表达变化；③编辑效率评估——通过测序峰图评估群体中的敲除比例。

KO 细胞池和 KO 稳定细胞系如何选择？

如果追求快速结果和低成本，KO 细胞池是理想选择（3 周交付）；如果需要高均一性和可重复性的正式实验数据，建议选择 KO 稳定细胞系（6-10 周）。很多研究者先使用细胞池进行预实验，确认方向后再构建稳定细胞系进行深入研究。

构建 KO 细胞池需要多少细胞？

建议起始细胞量 ≥1×10^6 个，确保转染后有足够的细胞进行筛选和扩增。细胞需处于良好的生长状态（对数生长期），传代次数不宜过多。Aimsmass 可提供细胞培养指导和优化建议。