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AIMS 专业服务

N 端测序

蛋白质 N 末端可以被进一步广泛修饰,包括引发甲硫氨酸去除、乙酰化和翻译后蛋白水解成熟,N 端测序对蛋白药物质量控制至关重要。

Edman/MS双方法验证
NPMN端修饰分析
~1 周标准交付

在蛋白质合成过程中产生的蛋白质 N 末端可以被进一步广泛修饰,包括引发甲硫氨酸去除、乙酰化和翻译后蛋白水解成熟。这样的修饰可能会显著地改变稳定性、活性和功能。影响蛋白质 N 端修饰,统称为 N 端蛋白修饰 (NPM),是蛋白质发生的最早的修饰。

蛋白质疗法,尤其是单克隆抗体,在各种疾病的治疗和诊断中发挥着重要作用。为了保证蛋白质治疗的完整性和纯度,需要对蛋白质序列和其他结构特征进行确定和确认。Edman 降解技术,特别是其自动化版本,已经成为蛋白质和多肽 N 端线性测序的重要技术超过 50 年。

Aimsmass N端测序分析示意图

近年来,虽然多种质谱方法对 Edman 降解进行了补充或很大程度上取代,但还没有一种简单的质谱方法可以对蛋白质的 N 端序列进行鉴定和从头测定。目前,基于质谱的蛋白质组学分析是研究蛋白质 N 端较为理想的方法。Aimsmass 将围绕 ICH 指南(特别是 ICH Q6B),为您提供全面的符合 GLP/cGMP 要求的 N 端测序分析服务。

服务优势

高灵敏性

结合荧光的质谱方法检测 N 端序列灵敏性较高。

高通量

质谱可以不受 N 端修饰影响,检测手法高通量。

高效率

检测手段比较简单,耗时短,效率高。

常见问题

Edman 降解和质谱法如何选择?

Edman 降解是确定 N 端序列的经典方法,适合 N 端未被封闭的蛋白质,可直接读取前 15-30 个氨基酸;质谱法(特别是 Top-Down MS/MS)不受 N 端修饰影响,可同时获取序列信息和修饰鉴定。两种方法互补使用可获得最全面的 N 端信息。

N端修饰 (NPM) 有哪些常见类型?

最常见的 N 端修饰包括:①甲硫氨酸切除(NME)——约 70% 的蛋白经历此过程;②N-alpha-乙酰化(NTA)——影响蛋白稳定性和互作;③N-豆蔻酰化(MYR)——参与膜定位。这些修饰可能显著改变蛋白质的稳定性、活性和功能。

N端测序的样品要求是什么?

Edman 降解需要纯度 >95%、总量 >10 ug 的蛋白样品(PVDF 膜转移或直接溶液形式);质谱法需要纯度 >90%、总量 >5 ug。样品应避免含甘氨酸、Tris 等干扰 Edman 反应的缓冲液成分。

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