抗体药物分子量分析服务 | LC-MS

近几十年来，基于蛋白质和多肽的生物治疗已经成为快速增长的药物类别。抗体药物表征分析包括许多内容，其中准确的分子量测定是关键环节。变性液相色谱-质谱 (LC-MS) 是获取分子量信息的一种有吸引力的方法。

LC-MS 相对于配体结合分析 (LBA) 的主要优点是特异性高、方法开发时间短、能够同时分析多个分析物。还需要使用 LC-MS 来研究肽和蛋白质的体内命运（分解代谢），以协助稳定性评估和化合物优化。

分析策略

高分辨质谱直接分析完整抗体分子量（~150 kDa），获取整体糖型分布和主要修饰信息。

通过有限酶切和/或二硫键还原生成 Lc、Fd 和 1/2 Fc 三个约 25 kDa 片段，消除 Fc 上糖基化引起的不均一性，提高检测灵敏度和分辨率。

使用专业软件对质谱数据进行去卷积处理，自动注释翻译后修饰，获得高精确分子量。

Middle-Down 方法不是将蛋白质作为小的替代肽或作为一个整体来分析，而是通过有限的酶消化和/或二硫键还原将分子分解成几个大的片段。该方法从单克隆抗体中生成三种类型的片段：轻链 (Lc)、重链 (Fd) 的 N 端半段和 1/2 Fc，每个片段约 25 kDa。

分子量是 ICH Q6B 要求的关键质量属性。通过分子量可以：验证蛋白序列正确性、检测翻译后修饰（糖基化、氧化、脱酰胺等）、评估蛋白水解截短、比较批次间一致性。分子量偏移可能提示意外修饰或降解。

LC-MS（ESI-TOF/Q-TOF）分辨率更高、质量精度更好（<5 ppm），适合精确分子量测定和修饰鉴定；MALDI-TOF 通量更高、成本更低，适合快速分子量筛查。对于抗体类药物，推荐使用 LC-MS 进行精确分析。