C端测序服务 | 蛋白C端序列分析

基于蛋白质的生物制药是在工程细胞中通过复杂的过程生产的，可能包含各种各样的变异和翻译后修饰，必须监控或控制以确保产品质量。利用稳健的克隆、表达、纯化和分析方法，在哺乳动物细胞中生产重组蛋白已经非常成熟。然而，意想不到的翻译后修饰 (PTMs) 或蛋白质产物变异可能会发生。

液相色谱-质谱联用或串联质谱联用 (LC-MS 和 LC-MS/MS) 已成为鉴定共价修饰（如 PTMs）或截断引起的质量差异的分析"工具箱"的首选。高分辨率和质量精度的质谱仪器，如电喷雾电离飞行时间 (ESI-TOF) 仪器，有助于对这些变化进行有信心的识别。

最近研发发现通过质谱分析，在稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中发现了大量低水平 (~1-5%) 的杂质。经液相色谱-质谱 (LC-MS) 测定，杂质比预期质量大 ~1177 Da。经过胰酶消化和 LC-MS/MS 分析，杂质以 Fc 序列延伸的形式定位到 Fc 的 C 端。通过从头测序获得的氨基酸序列与转染 CHO 细胞所用的载体序列的一部分相匹配。

服务优势

高效低耗时

Top-Down 蛋白测序不需要酶解，可以缩短检测时耗。

高灵敏性

质谱方法检测 C 端序列灵敏性较高，可检测低丰度变异体。

高通量

质谱可获取足够肽段片段信息，增加检测成功率。

常见问题

C端测序的方法有哪些？

主要有两种方法：①质谱法（LC-MS/MS）——通过 Top-Down 或 Middle-Down 策略获取 C 端序列信息，灵敏度高、通量好；②羧肽酶法——使用羧肽酶逐步切除 C 端氨基酸残基，结合质谱或 HPLC 分析释放的氨基酸序列。质谱法已成为主流方法。

为什么C端测序对生物制药重要？

ICH Q6B 指南要求蛋白质（肽）药物的 C 端序列信息。C 端可能发生非预期的序列延伸（如选择性剪接产物）、翻译后修饰或蛋白水解截短，这些变化可能影响药物安全性、有效性和免疫原性。

C端测序的样品要求是什么？

蛋白纯度 >90%，总量 >50 ug。需提供纯化后的蛋白样品（冻干粉或溶液）。缓冲液应避免含高浓度盐和蛋白酶抑制剂混合物。

AIMS 专业服务

C 端测序

服务优势

高效低耗时

高灵敏性

高通量

常见问题

C端测序的方法有哪些？

为什么C端测序对生物制药重要？

C端测序的样品要求是什么？

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