二硫键质谱分析
二硫键是蛋白内部半胱氨酸残基形成的蛋白翻译后修饰,这共价键的形成来自半管氨酸的自由巯基集团,主要是由酶催化形成,例如蛋白二硫键异构酶和内质网氧化还原酶-1,二硫键是蛋白结构中重要组成部分,确保蛋白适当折叠,保持稳定和正常发挥功能。
二硫键的作用
- 三级结构:二硫键确保蛋白正常的折叠;他们能够使蛋白形成正确的结构亚型,能够稳定更高级别的构象以确保能行使正常的生物功能。
- 四级结构:二硫键对蛋白行使正常功能起决定性作用,二硫键的还原能够引起某些蛋白活性的改变。
既然二硫键在生物体中如此重要,科研工作者们也需要更为高效的方法进行检测分析。有几种常用方法可以对二硫键进行定位,包括核磁共振,X射线晶体分析,Edman降解,以及大部分科研工作者采用的高效液相串联质谱方法。
AIMS提供的是高效专业的蛋白二硫键定位服务,有专业的HPLC-MS/MS质谱平台,可以分析各种真核生物和原核生物样本。
服务流程
二硫键分析前处理
- 用NEM进行自由巯基的还原烷基化处理
- 随后用IAM对断开的二硫键进行封闭
- 凝胶或溶液内酶解(depends on type of samples you send us)
- HPLC 分离, 随后进行MS/MS 分析
- 二硫键位点数据分析
二硫键分析酶切方式
注意:避免在样本准备过程中的二硫键自然生成。
- 2个半胱氨酸残基之间反应
- 1个半胱氨酸和1个二硫键之间反应
- 2个已经形成二硫键的半胱氨酸之间发生的反应
提示:温度,PH,和自由半胱氨酸残基都有可能影响真实结果。
服务优势
- 高精度及准确性:能准确确定二硫键肽位点,排除假阳性影响。
- 不同类型分析:可对不同的二硫键形成类型进行分析。
- 快速操作简单:前期处理简单,不需额外实验操作。
FAQ+
送样准备
报告解读
谷胱甘肽化位点修饰