本页面是S-亚硝基化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标蛋白，需要精确定位其上的S-亚硝基化修饰位点，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性S-亚硝基化分析，请访问 S-亚硝基化蛋白质组学。
一氧化氮（NO）是血管舒张、血小板聚集抑制、神经传递和抗菌等重要生理过程的调控因子。NO 通过将亚硝基基团转移到半胱氨酸的巯基上形成 S-亚硝基硫醇（SNO），这一过程称为 S-亚硝基化。蛋白 S-亚硝基化是一种可逆的翻译后修饰，被认为是蛋白活性、定位、稳定性和蛋白互作的调节剂。
S-亚硝基化的动态平衡依赖于多种调控系统：GSNO（S-亚硝基谷胱甘肽）与蛋白-SH 之间的平衡由 GSNOR 调控，Trx/TrxR（硫氧化还原蛋白）系统介导 SNO 蛋白的去亚硝基化。尽管所有半胱氨酸残基理论上都可发生 S-亚硝基化，但只有特定的修饰具有功能调控意义。
S-亚硝基化位点鉴定的核心目标是：在已知的特定蛋白上，精确鉴定 S-亚硝基化发生在哪一个半胱氨酸残基上。直接检测 SNO 修饰（+29 Da）具有挑战性，因为 S-NO 键不稳定，通常采用间接的生物素开关策略。
S-亚硝基化检测策略
由于 S-NO 键的不稳定性，发展了多种间接检测策略：
生物素开关法（Biotin Switch）
原理：三步法：1) MMTS 封闭自由巯基；2) 抗坏血酸特异性还原 S-NO；3) Biotin-HPDP 标记暴露的巯基
优势：特异性好，可区分 S-亚硝基化和自由巯基
适用场景：蛋白水平的 SNO 检测，Western Blot 验证
注意事项：全程避光操作，避免 S-NO 光解
Biotin Switch抗坏血酸还原特异性好
直接质谱检测
原理：直接检测 SNO 修饰肽段的 +29 Da 质量偏移
优势：无需间接标记，直接确认修饰位点
挑战：S-NO 键在质谱条件下不稳定，容易中性丢失（-NO, -29 Da）
适用场景：结合生物素开关法验证，双重确认修饰位点
直接检测+29 Da中性丢失
技术方案
S-亚硝基化位点鉴定主要采用生物素开关法结合 LC-MS/MS 分析。由于 S-NO 键不稳定，直接质谱检测具有挑战性，间接策略更为可靠。标准流程如下：
巯基封闭MMTS/NEM 封闭自由巯基
→
SNO 还原抗坏血酸特异性还原 S-NO 键
→
生物素标记Biotin-HPDP 标记暴露的巯基
→
亲和富集 + LC-MS/MS链霉亲和素富集后质谱检测
→
位点定位S-亚硝基化位点确认
服务优势
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多种检测策略
可同时采用生物素开关法和直接质谱检测，双重验证修饰位点，提高结果可靠性。
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靶向精准
针对已知目标蛋白进行定向分析，结果精确到具体半胱氨酸残基。
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样本适用广
可对蛋白直接质谱检测，或转换为 Biotin、His 等标签后检测，适用范围广。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，可检测 SNO 修饰的特征质量偏移和中性丢失，确保位点定位精度。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
S-亚硝基化位点鉴定和 S-亚硝基化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白，精准定位 S-亚硝基化发生在哪个半胱氨酸残基上。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性分析。已知目标蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。
为什么 S-亚硝基化比其他修饰更难检测？
S-NO 化学键非常不稳定，容易在光照、高温和碱性条件下分解。直接质谱检测时 SNO 修饰的肽段常出现 -29 Da 中性丢失。因此通常采用间接的生物素开关法，先稳定标记再检测。全程需避光、低温操作。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，细胞样本 2×107 个，最低蛋白质量 1mg。样本制备需在全程避光、低温条件下进行，避免 S-NO 键的非特异性分解。不建议反复冻融。
如何排除假阳性？
生物素开关法的关键控制：1) MMTS 封闭步骤需完全封闭自由巯基；2) 设置不含抗坏血酸的对照（-Asc control），排除非特异性标记；3) 直接质谱检测 SNO 的 +29 Da 偏移作为正交验证。
项目周期多长？
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括：原始质谱数据、S-亚硝基化位点定位结果表、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性S-亚硝基化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
