本页面是瓜氨酸化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标蛋白，需要精确定位其上的瓜氨酸化修饰位点，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性瓜氨酸化分析，请访问 瓜氨酸化蛋白质组学。
蛋白质瓜氨酸化翻译后修饰由蛋白精氨酸脱亚胺酶（PAD）家族催化发生。PAD 将精氨酸（Arg）残基的胍基转化为尿素基团（瓜氨酸），同时释放一分子氨（NH3），质量偏移仅为 +0.984 Da。瓜氨酸异常累加与许多炎症疾病和癌症有关，PAD 抑制剂在风湿性关节炎、红斑狼疮、动脉粥样硬化和溃疡性结肠炎等疾病中具有显著疗效。
瓜氨酸化蛋白可能更广泛地作为特定疾病状态的生物标志物。然而，由于瓜氨酸化后仅发生 +0.984 Da 的微小质量变化，瓜氨酸化残基的识别仍然具有挑战性。这种微小变化加上体内瓜氨酸含量较低，很容易与 13C 同位素或脱氨情况发生混淆。此外，精氨酸脱亚胺引起的蛋白酶裂解变化——通过中和精氨酸残基的正电荷，使胰蛋白酶在瓜氨酸位点后不再裂解——增加了质谱分析的难度。
瓜氨酸化位点鉴定的核心目标是：在已知的特定蛋白上，精确鉴定瓜氨酸化发生在哪一个精氨酸残基上，并克服 +0.984 Da 微小质量偏移带来的检测挑战。
瓜氨酸化检测方法
由于 +0.984 Da 的微小质量偏移，发展了多种特异性检测策略：
化学衍生化 + 质谱法
原理：使用 2,3-丁二酮或安替比林进行衍生化，使瓜氨酸肽段分子量分别增加 50 Da 或 238 Da
优势：增大质量偏移，使瓜氨酸肽段能通过质谱与其他肽段区分
适用场景：目标蛋白瓜氨酸化位点精确鉴定
注意事项：衍生化反应需优化条件，避免过度衍生化
2,3-丁二酮安替比林+50/+238 Da
RhPG/BPG 探针法
原理：苯乙二醛（PG）在酸性环境中与瓜氨酸尿素基团特异性环化，RhPG 用于荧光检测，BPG 用于亲和富集
优势：检测限低（~20 fmol），可监测瓜氨酸化动力学，支持高通量
适用场景：复杂蛋白样本中瓜氨酸蛋白的富集和检测
进阶方法：4-溴苯乙二醛用于 MALDI-MS 溴特征区分
RhPG 探针BPG 亲和高灵敏度
技术方案
瓜氨酸化位点鉴定通过化学衍生化策略增大质量偏移，克服 +0.984 Da 微小变化的检测挑战，再进行 LC-MS/MS 分析精确定位修饰位点。标准流程如下：
蛋白提取目标蛋白纯化/SDS-PAGE 分离
→
化学衍生化2,3-丁二酮/BPG 衍生化标记
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酶切消化凝胶或溶液内蛋白酶解
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LC-MS/MS高分辨质谱采集
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位点定位瓜氨酸化位点确认
服务优势
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化学衍生化增强检测
通过 2,3-丁二酮或安替比林衍生化，将 +0.984 Da 微小偏移放大至 +50/+238 Da，显著提高质谱检测的可靠性和特异性。
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探针法高灵敏度
RhPG 探针检测限低至 ~20 fmol，BPG 亲和探针可实现瓜氨酸化蛋白的特异性富集，适用于低丰度样本。
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靶向精准
针对已知目标蛋白进行定向分析，结果精确到具体精氨酸残基。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，精确区分衍生化后的瓜氨酸肽段与其他修饰肽段，确保位点定位精度。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
瓜氨酸化位点鉴定和瓜氨酸化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标蛋白，精准定位瓜氨酸化发生在哪个精氨酸残基上。蛋白质组学则在全蛋白水平进行系统性分析。已知目标蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。
瓜氨酸化为什么比其他修饰更难检测？
瓜氨酸化（精氨酸脱亚胺）仅产生 +0.984 Da 的微小质量偏移，容易与 13C 同位素峰或脱氨修饰混淆。此外，精氨酸脱亚胺后失去正电荷，导致胰蛋白酶裂解模式改变。因此需要化学衍生化策略来增大质量偏移。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，细胞样本 2×107 个，最低蛋白质量 1mg。支持 SDS-PAGE 胶条和蛋白溶液样本。瓜氨酸化修饰丰度较低，建议提供足量样本。
PAD 抑制剂会影响瓜氨酸化检测吗？
是的。PAD 抑制剂（如 Cl-amidine、BB-Cl-amidine）会抑制瓜氨酸化反应，降低修饰水平。如果研究 PAD 抑制剂的效果，建议同时设置未处理对照。体内 PAD 活性受钙离子浓度和氧化还原状态调控。
项目周期多长？
标准交付周期约 1-2 周。交付内容包括：原始质谱数据、瓜氨酸化位点定位结果表（含衍生化信息）、修饰肽段序列、关键质谱谱图。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性瓜氨酸化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
