本页面是糖基化「位点鉴定」服务入口。如果您已有明确的目标糖蛋白（如特定抗体、受体或血清蛋白），需要精确定位其上的糖基化位点及糖链组成，请在此选择对应服务。如需在全蛋白水平进行系统性糖基化全景分析，请访问 糖基化蛋白质组学。
糖基化是最常见的翻译后修饰之一，估计超过 50% 的真核蛋白存在糖基化修饰。与磷酸化等模板型修饰不同，糖基化属于非模板型修饰——同一氨基酸位点可连接多种不同糖链结构（糖型），产生显著的微观异质性。这种位点特异性糖型分布直接影响蛋白的折叠、稳定性、亚细胞定位和生物学活性。
糖基化位点鉴定的核心目标是：在已知的特定糖蛋白上，精确鉴定糖基化发生在哪一个氨基酸残基上，同时解析该位点连接的糖链组成，从而为后续的功能验证、药物开发或质量控制提供分子水平的确凿证据。
如何选择位点鉴定还是蛋白质组学？
在开始实验前，请根据您的研究目标选择合适的服务类型：
| 对比维度 |
位点鉴定（本页面） |
糖基化蛋白质组学 |
| 目标蛋白 |
已知，有明确研究糖蛋白 |
未知 / 全蛋白水平探索 |
| 样本量 |
较少即可 |
需更多样本 |
| 产出结果 |
精确到残基的糖基化位点 + 糖链组成 |
全糖基化景观图谱 + 定量分析 |
| 交付周期 |
~1-2 周 |
3-4 周 |
| 适用场景 |
验证已知糖蛋白修饰位点、生物药糖型评价 |
发现新糖基化位点、系统性全景分析 |
如需全蛋白水平的系统性糖基化分析，请访问 糖基化蛋白质组学（Glyco-DIA）。
N-糖基化与 O-糖基化
哺乳动物蛋白糖基化主要分为两大类，在连接方式、结构特征和分析策略上各有不同：
N-糖基化
连接位点：天冬酰胺（Asn）残基
共识序列：Asn-X-Ser/Thr（X 非脯氨酸）
结构特征：五糖核心结构保守，外周糖链多样化（高甘露糖型、复杂型、杂合型）
分析策略：可用 PNGase F 酶切释放糖链，将 Asn 转为 Asp（质量偏移 +0.984 Da），通过质量偏移确认糖基化位点
典型蛋白：IgG Fc 段（Asn297）、转铁蛋白、甲胎蛋白（AFP）
PNGase F 酶切
HILIC 富集
凝集素亲和
O-糖基化
连接位点：丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）残基
共识序列：无明确共识序列
结构特征：Core1-Core8 等多种核心结构，黏蛋白型 O-糖最为常见
分析策略：无通用释放酶，需 EThcD 碎裂直接获取肽段骨架 c/z 离子定位位点，解析难度更高
典型蛋白：黏蛋白（MUC1/MUC16）、IgA1 铰链区、Notch 受体
EThcD 碎裂
无通用释放酶
HCD 辅助
Aimsmass 标配 EThcD+HCD 双碎裂模式，一次采集同时获取糖链组成（HCD 氧鎓离子）与精确位点（EThcD c/z 离子），解决纯 HCD 无法精确定位 O-糖位点的行业通病。
技术方案
糖基化位点鉴定针对特定目标蛋白，通过特异性富集糖肽后进行 LC-MS/MS 分析，精确定位修饰位点及糖链组成。标准流程如下：
蛋白提取目标蛋白纯化/富集
→
酶切消化胰蛋白酶肽段制备
→
糖肽富集HILIC/凝集素亲和
→
LC-MS/MSEThcD+HCD 双碎裂
→
位点定位糖链组成+位点确认
富集策略
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HILIC 亲水相互作用富集
利用糖链的亲水性质，通过 HILIC 色谱柱选择性富集糖肽。适用范围广，对 N-糖和 O-糖肽均有良好富集效果，是目前最通用的糖肽富集方法。
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凝集素靶向富集
利用特定凝集素（如 ConA、WGA、PNA 等）与糖链结构的特异性结合进行靶向富集。适用于特定糖型的定向分析，如 ConA 富集高甘露糖型、WGA 富集唾液酸化糖链。
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PNGase F 酶切辅助鉴定（N-糖专用）
通过 PNGase F 在 H2(18)O 中酶切释放 N-糖链，使 Asn 转为 Asp 并产生 +2.989 Da 的质量偏移，直接通过质谱质量偏移确认糖基化位点。适用于 N-糖位点的快速确认。
服务优势
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N/O 糖同步覆盖
标配 EThcD+HCD 双碎裂模式，HCD 产生糖链特征氧鎓离子用于鉴定糖链组成，EThcD 保留肽段骨架 c/z 离子用于精确定位修饰位点。一次实验同时覆盖 N-糖和 O-糖位点，解决纯 HCD 无法精确定位 O-糖的行业通病。
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靶向精准
针对已知目标糖蛋白进行定向糖基化分析，结果精确到具体氨基酸残基及糖链组成，直接服务于功能验证研究和生物药质量评价。
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快速高效
仅需提供足量目标蛋白，标准周期约 1-2 周即可交付数据。支持血清、重组蛋白等特殊样本类型。
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高分辨质谱平台
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统，确保糖肽检测的灵敏度和位点定位精度。
送样要求
常规动物组织：100mg
软体动物组织：1g
常规植物组织：1g
植物果实及种子：2g-4g
细胞样本：2×107
菌类样本：150mg
最低蛋白质量：1mg
检测平台：Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200，扫描速度 40 Hz），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统
糖基化位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体请咨询技术团队。
详细送样指南请参考 送样准备。
常见问题
糖基化位点鉴定和糖基化蛋白质组学有什么区别？
位点鉴定针对已知的特定目标糖蛋白，精准定位糖基化发生在哪个天冬酰胺（N-糖）或丝/苏氨酸（O-糖）残基上，适用于已有明确研究目标的场景。蛋白质组学（Glyco-DIA）则在全蛋白水平进行系统性糖基化分析，无需预设目标，适合探索性研究和发现新的糖基化位点。简单来说：已知糖蛋白选位点鉴定，探索未知选蛋白质组学。两者可配合使用——先通过组学发现候选位点，再用位点鉴定进行靶向验证。
N-糖基化和 O-糖基化位点鉴定有什么不同？
N-糖基化发生在天冬酰胺（Asn）残基上，共识序列为 Asn-X-Ser/Thr，可用 PNGase F 酶切释放糖链后进行位点鉴定，技术相对成熟。O-糖基化发生在丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）残基上，无明确共识序列，且无通用释放酶，需采用 EThcD 碎裂直接获取肽段骨架信息来定位位点，解析难度更高。Aimsmass 标配 EThcD+HCD 双碎裂模式，可同时覆盖 N 糖和 O 糖位点。
送样要求是什么？
常规动物组织 100mg，软体动物组织 1g，常规植物组织 1g，植物果实及种子 2g-4g，细胞样本 2×107 个，菌类样本 150mg，最低蛋白质量 1mg。糖基化位点鉴定因针对特定蛋白，样本量要求相对灵活，支持血清、重组蛋白等特殊样本，具体可咨询技术团队。
项目周期多长？交付哪些内容？
标准交付周期约 1-2 周，从样本接收到数据报告交付。交付内容包括：原始质谱数据（.raw）、糖基化位点定位结果表（含位点置信度）、糖链组成信息、关键质谱谱图。如需生信下游分析可另行沟通。
数据质量如何保证？
采用 Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 / Q Exactive HF-X 高分辨质谱仪（分辨率 240,000 @ m/z 200），搭配 EASY-nLC 1200 纳升液相色谱系统。HCD 碎裂获取糖链特征氧鎓离子，EThcD 碎裂获取肽段骨架 c/z 离子，双重验证确保位点定位置信度（localization probability）≥ 0.75。
相关服务
如需在全蛋白水平进行系统性糖基化分析，或对其他修饰类型进行研究，可参考以下服务：
